First Baby Born in Brazil after Simultaneous Diagnosis through Non-Invasive and Conventional PGT-A / Primeiro bebê nascido no Brasil após diagnóstico simultâneo por PGT-A não-invasivo e convencional

Abstract Non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies (niPGT-A) aiming to assess cell-free embryonic DNA in spent culturemedia is promising, especially because it might overcome the diminished rates of implantation caused by the inadequate performance of trophectoderm (TE) biopsy. Our center is part of the largest study to date assessing the concordance between conventional PGT-A and niPGT-A, and we report here the delivery of the first baby born in Brazil using niPGT-A. The parents of the baby were admitted to our center in 2018. They did not present history of infertility, and they were interested in using in vitro fertilization (IVF) and PGT-A in order to avoid congenital anomalies in the offspring. A total of 11 (3 day-5 and 8 day-6) expanded blastocysts were biopsied, and the spent culture media (culture from day-4 to day-6) from 8 day-6 blastocysts were collected for niPGT-A. Overall, 7 embryos yielded informative results for trophectoderm (TE) and media samples. Among the embryos with informative results, 5 presented concordant diagnosis between conventional PGTA and niPGT-A, and 2 presented discordant diagnosis (1 false-positive and one falsenegative). The Blastocyst 4, diagnosed as 46, XY by both niPGT-A and conventional PGTA, was warmed up and transferred, resulting in the birth of a healthy 3.8 kg boy in February 2020. Based on our results and the recent literature, we believe that the safest current application of niPGT-A would be as a method of embryo selection for patients without an indication for conventional PGT-A. The approximate 80% of reliability of niPGT-A in the diagnosis of ploidy is superior to predictions provided by other noninvasive approaches like morphology and morphokinetics selection.

Resumo Abordagens para o teste genético pré-implantacional não-invasivo para aneuploidias (non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies, niPGT-A, em inglês) com o objetivo de avaliar o DNA embrionário livre são promissoras, especialmente porque estas podem reverter as menores taxas de implantação causadas por inadequada biópsia de trofectoderma (TE). Nesse contexto, nosso centro é parte do maior estudo atual que avalia as taxas de concordância entre PGT-A convencional e niPGT-A, e relatamos aqui o nascimento do primeiro bebê brasileiro após niPGT-A. Os pais do bebê foram admitidos no nosso centro em 2018. Eles não apresentavam histórico de infertilidade, e estavam interessados em utilizar os tratamentos de fertilização in vitro (FIV) e PGT-A para evitar anomalias congênitas na progênie.Umtotal de 11 blastocistos expandidos (3 do dia-5 e 8 do dia-6) foram submetidos a biópsia, e os meios de cultivo condicionados (cultivo do dia-4 ao dia-6) de 8 blastocistos do dia-6 foram coletados para niPGT-A. No total, resultados informativos para as amostras de TE e dos meios foram obtidos para sete embriões. Entre os embriões com resultado informativo, 5 apresentaram diagnóstico concordante entre PGT-A convencional e niPGT-A, e 2 apresentaram diagnóstico discordante (1 falso positivo e 1 falso negativo). O Blastocisto 4, diagnosticado como 46, XY por ambos niPGT-A e PGT-A convencional, foi desvitrificado e transferido, o que resultou no nascimento de ummenino saudável, que pesava 3,8 kg, em fevereiro de 2020. Com base em nossos resultados e literatura contemporânea, acreditamos que a aplicação atualmais segura do niPGT-A seria como método de seleção embrionária para pacientes sem indicação ao PGT-A convencional. A confiabilidade aproximada de 80% do niPGT-A para determinação da ploidia ainda é superior àquela obtida com abordagens não invasivas, como seleção morfológica ou morfocinética.

Gestações espontâneas após punção ovariana para maturação in vitro em mulheres com síndrome dos ovários policísticos / Spontaneous pregnancies after ovarian puncture for in vitro maturation in women with the polycystic ovary syndrome

OBJETIVO: relatar três casos de gestações espontâneas em portadoras da síndrome dos ovários policísticos (SOP) que ocorreram nos meses subsequentes à realização de punção ovariana transvaginal para captação oocitária para a maturação in vitro. MÉTODOS: foram incluídas no estudo três pacientes inférteis portadoras de SOP submetidas à maturação in vitro dos oócitos sem estimulação ovariana prévia. Durante o procedimento da coleta dos oócitos, cada ovário foi perfurado de quatro a oito vezes. RESULTADO: nenhuma paciente engravidou com a técnica da maturação in vitro. Avaliando o seguimento dos casos, em sete meses após o procedimento, as três pacientes engravidaram sem o auxílio de técnicas de reprodução assistida, resultando em três nascimentos. CONCLUSÕES: as múltiplas perfurações nos ovários destas pacientes portadoras da SOP, durante o procedimento de coleta dos oócitos, podem ter contribuído para a obtenção da gestação nos meses subsequentes ao procedimento.

PURPOSE: to report three cases of spontaneous gestation in women with polycystic ovarian syndrome (PCOS), that occurred in the months subsequent to transvaginal oocyte retrieval for in vitro maturation (IVM). METHODS: three infertile patients with PCOS, submitted to oocytes' IVM without previous ovarian stimulation, were included in the study. During the procedure of oocytes' collection, each ovary was drilled from four to eight times. RESULTS: none of the patients got pregnant with the IVM technique. Evaluating the cases' follow-up, in seven months after the procedure, the three patients got pregnant without the help of techniques of assisted reproduction, which resulted in three births. CONCLUSIONS: the multiple drillings in the ovary of these patients with PCOS, during the process to collect oocytes, may have contributed to their pregnancy in the months following the procedure.

A aplicação clínica de maturação in vitro de oócitos humanos (IVM) / The clinical use of human oocyte in vitro maturation (IVM)

A coleta de oócitos imaturos, a partir de ovários não estimulados em combinação com a maturação in vitro de oócitos (lVM) e fertilização in vitro é uma técnica de reprodução assistida que tem recebido crescente interesse nos últimos anos. O objetivo desta revisão é fazer um levantamento do estado da arte da maturação in vitro de oócitos humanos, particulamente em ciclos não estimulados e enfatizar o potencial desta metodologia dentre as técnicas de reprodução assistida.

Origem, crescimento, degeneração e maturação in vitro do oócito / Origin, growth, degeneration and in vitro maturation of the oocyte

Técnicas de reprodução assistida, tais como a fertilização in vitro, a injeção intracitoplasmática de espermatozóides e a transferência de embriões têm tido seu avanço limitado inúmeras vezes devido a uma escassez de oócitos para fertilização. A estimulação artificial, a partir do uso de gonadotrofinas exógenas aumenta o numero de gametas prestes a ovular, mas a resposta aos tratamentos é bastante variável. A maturação in vitro de oócitos imaturos é uma alternativa que vem despertando maior interesse dos pesquisadores e clínicos da reprodução assistida nos últimos anos. Entretanto, um fator limitante ao desenvolvimento e aprimoramento dos métodos de cultivo in vitro de oócitos imaturos é o desconhecimento dos fatores envolvidos desde a origem, o crescimento e a maturação in vivo dos oócitos. Este artigo procurou fazer uma ampla revisão do que é sabido e compreendido desde o surgimento das primeiras células germinativas no feto feminino, até seu desaparecimento na menopausa. Finalmente, fizemos uma breve exposição sobre o estado de arte da maturação in vitro como uma alternativa ou um acréscimo às tecnologias atualmente empregadas em reprodução assistida.

Comparação entre as características do sêmen humano preservado a +4ºC e -196ºC por 24 horas / Comparison between the characteristics of human semen preserved at +4ºC and û196ºC for 24 hours

OBJETIVOS: avaliar as características do sêmen humano preservado a +4ºC e a -196ºC por 24 h e determinar a técnica ideal para utilização em procedimentos específicos. MÉTODOS: amostras de sêmen de 24 voluntários foram analisadas após a coleta e divididas em duas alíquotas, uma resfriada em a +4ºC e outra congelada a -196ºC. As amostras foram mantidas em baixas temperaturas por 24 h e então em temperatura ambiente por 30 minutos (T1), capacitadas (T2) e incubadas a +37ºC por 90 minutos (T3), sendo avaliadas quanto à concentração e motilidade progressiva em T1, T2 e T3. Para análise dos resultados obtidos com as duas diferentes técnicas foi utilizado o Modelo Linear Geral e para análise dos dados obtidos com a mesma técnica, em dois diferentes momentos de observação, foi utilizado o teste de Wilcoxon (a de 5 por cento e p<0,05). RESULTADOS: houve perda de dados em uma amostra de sêmen fresco, em uma amostra após preservação, em 5 amostras após capacitação e em duas amostras após incubação. A média do número total de espermatozóides móveis/mL (NTEM) nas amostras de sêmen fresco foi 39,7 milhões (1,3-104,0). Após preservação, o NTEM médio no sêmen resfriado foi 9,6 milhões (0-37,4) e no congelado 8,7 milhões (0-41,2). Após capacitação, o NTEM médio foi 5,4 milhões no sêmen resfriado (0-21,7) e no congelado (0-28). Após incubação, o NTEM médio no sêmen resfriado foi 9,8 milhões (0-40,5) e no congelado 4,4 milhões (0-25,6). Não houve diferença significativa (p>0,05) quanto à concentração, motilidade e NTEM entre as técnicas nos três momentos de observação. Tampouco houve diferença entre as variáveis após capacitação e após incubação no sêmen resfriado, mas, no congelado, a concentração foi significativamente superior após capacitação. CONCLUSÕES: embora a concentração e a motilidade progressiva não tenham diferido em ambas as técnicas, sugere-se o uso do resfriamento em procedimentos específicos a curto prazo, devido à simplicidade e baixo custo. Quando o sêmen congelado for necessário, recomenda-se a utilização logo após a capacitação para evitar redução da qualidade do mesmo.

Viabilidade e fertilização in vitro de oócitos bovinos após vitrificação / Viability and in vitro fertilization of bovine oocytes after vitrification

OBJETIVOS: avaliar a técnica de criopreservaçäo por vitrificaçäo em DMSO 6 M para oócitos bovinos maturados in vitro e os efeitos do tempo de exposiçäo às soluçöes de vitrificaçäo (SV). MÉTODOS: estudo experimental tipo coorte. Ovários de bovinos foram obtidos em frigorífico e transportados ao laboratório. Os oócitos foram aspirados. A partir da SV contendo DMSO 6 M (SV 100 por cento), foram preparadas soluçöes a 25 e 65 por cento. Oócitos foram maturados in vitro por 18-22 horas. Para vitrificaçäo, os oócitos foram colocados em SV 25 por cento, por 5 minutos, transferidos à SV 65 por cento, pipetados em SV 100 por cento para palhetas e estocados em nitrogênio líquido. No primeiro grupo experimental, a exposiçäo à SV 65 por cento tomou até 60 segundos e no segundo grupo näo ultrapassou 30 segundos. Para descongelamento, as palhetas foram expostas ao ar por 10 segundos, colocadas em banho-maria por 10 segundos e seu conteúdo expelido e mantido em soluçäo de sacarose por 5 minutos. No terceiro grupo, os oócitos passaram por todas SV menos pelo nitrogênio líquido. Os oócitos recuperados foram inseminados. Para controle, oócitos frescos, maturados in vitro, foram inseminados. RESULTADOS: após vitrificaçäo, foram recuperados 69,1 e 59,8 por cento dos oócitos nos grupos de 30 segundos e 60 segundos, respectivamente, e 24 horas após inseminaçäo pareceram morfologicamente normais 93 e 89,1 por cento deles, respectivamente. No grupo de oócitos expostos às SV sem vitrificaçäo, foram recuperados 75,6 por cento, sendo 84,6 por cento destes viáveis 24 horas após inseminaçäo. Näo ocorreu fertilizaçäo nos grupos experimentais. Entre os controles frescos, foram fertilizados 65,4 por cento dos oócitos. CONCLUSÖES: a técnica de vitrificaçäo utilizando DMSO 6 M näo é aplicável para criopreservaçäo de oócitos bovinos maturados in vitro. A reduçäo do tempo de exposiçäo às SV näo superou o efeito deletério sobre a capacidade fertilizadora dos oócitos. Aprimoramentos da técnica säo necessários para proteçäo da zona pelúcida e do oolema

Características do sêmen 24 horas após descongelamento e capacitação em diferentes tratamentos de Percoll / Semen characteristics 24 hours after thawing and capacitation in different Percoll treatments

Determinar o período pós-descongelamento no qual o sêmen conserva sua capacidade fecundante e testar diferentes meios para preparo do sêmen descongelado. Vinte e quatro amostras de sêmen de 11 voluntários foram analisadas, congeladas, armazenadas em nitrogênio líquido, descongeladas convencionalmente e capacitadas em três tratamentos de Percoll preparados em Ham F-10: 90 por cento, 45 por cento e 90 por cento - 45 por cento. As amostras foram avaliadas quanto à concentração e motilidade imediatamente após preparo (0h) e 2,4,8, e 24 horas pós-incubação a 37ºC e 5 por cento CO2. A concentração média da amostras decresceu das 0 às 24h em todos os preparos, sendo superior em Percoll 45 por cento, seguido por 90 por cento-45 por cento e 90 por cento (p<0,05). A motilidade progressiva média aumentou das 0 às 8h em Percoll 45 por cento e 90 por cento-45 por cento, diminuindo das 2 às 24h em Percoll 90 por cento. Relacionando concentração e motilidade, os melhores resultados das 0 às 4h foram obtidos com Percoll 45 por cento e 90 por cento-45 por cento. Os valores obtidos em Percoll 90 por cento foram sempre inferiores aos demais. A diferença entre os tratamentos foi significativa (p<0,05), sendo Percoll 45 por cento superior, seguido por 90 por cento-45 por cento. Sugere-se que o sêmen congelado/descongelado seja capacitado em Percoll 45 por cento e utilizado num período inferior a 8h, devido à redução da motilidade observada, ou a partir de então, em casos específicos.

Fertilizaçäo e gestaçäo após ICSI e cultura de tecido testicular em casos de azoospermia näo obstrutiva: relato de três casos / Fertilization and pregnancy after ICSI and testicular tissue culture in cases of non-obstructive azoospermia: three case reports

Descrever os resultados iniciais do programa de biópsia antecipada e cultura de tecido testicular, seguida de injeçäo intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriöes (TE) em casos de azoospermia näo obstrutiva. Säo relatados 3 casos. Em todos os casos houve fertilizaçäo dos oócitos. Em dois deles procedeu-se à transferência de embriöes, ambos resultando em gestaçäo, uma com bebê nascido ao termo e a outra em curso, com 8 semanas por ocasiäo deste relato. A técnica de biópsia antecipada e cultura de tecido testicular, seguida por ICSI e transferência de embriöes, é factível e oferece um bom prognóstico de gestaçäo, sendo, em nossa opiniäo, a opçäo terapêutica indicada para pacientes com azoospermia näo obstrutiva.

Influência da morfologia espermática avaliada pelo critério estrito nos resultados de FIV/ICSI / Influence or sperm morphology, evaluated by strict criteria, on IVF/ICSI outcome

Objetivos: Avaliar a importância da análise morfológica criteriosa do sêmen na previsäo dos resultados de FIV e ICSI. Material e Métodos: Foi realizado um estudo prospectivo incluindo 52 ciclos de FIV e ICSI. Amostras seminais coletadas no dia da punçäo ovariana foram preparadas para análise microscópica seguindo o critério estrito de Kruger (Kruger et al, 1988). Os resultados das análises seminais foram correlacionados com as taxas de gestaçäo nos respectivos grupos de casais normospérmicos e teratospérmicos. Resultados: Näo foram estatisticamente significativas as diferenças entre os dois grupos de pacientes em termos de número de oócitos coletados, taxas totais de fecundaçäo, número de embriöes transferidos e taxas de gestaçäo. No entanto, das três gestaçöes obtidas no grupo de pacientes teratospérmicos, duas (67 por cento) resultaram em abortamento, enquanto que apenas um aborto (8 por cento) foi detectado no grupo de pacientes normospérmicos. Conclusöes: A analíse espermática criteriosa de Kruger é mais um elemento preditivo para a avaliaçäo das chances de um casal ter uma gestaçäo ao termo, após técnicas de FIV e ICSI. Nossos resultados sugerem que taxas elevadas de teratospermia aumentam o risco de aborto

Avaliaçäo da motilidade do sêmen preservado a +4ºC: resultados preliminares / Motility evaluation of semen stored at +4ºC: preliminary results

OBJETIVO: Testar a aplicabilidade da técnica de preservaçäo de sêmen a +4ºC visando a realizaçäo de pool de amostras de sêmen para inseminaçäo artificial. MATERIAL E MÉTODO: 9 amostras de sêmen normospérmico de doadores voluntários foram submetidas à análise de rotina (WHO, 1992), centrifugadas com Percoll, diluídas com meio para resfriamento de sêmen e levadas à geladeira a +4ºC. A motilidade foi reavaliada 24, 48 e 72 após. RESULTADOS: A motilidade inicial progressiva média (graus a e b) das amostras foi 55,55 por cento; após refrigeraçäo por 24 horas 30,55 por cento (reduçäo de 20 por cento em relaçäo à inicial); após 48 horas 20 por cento (reduçäo de 35,55 por cento em relaçäo à inicial), e após 72 horas 15,55 por cento (reduçäo de 40 por cento em relaçäo à inicial). Houve reduçäo significativa da motilidade média em relaçäo à inicial após resfriamento por 48 e 72 horas, embora duas amostras tenham apresentado 30 por cento de motilidade progressiva após 48 horas e uma amostra após 72 horas. CONCLUSäO: Considerando-se as variaçöes individuais das amostras e a técnica utilizada, verificou-se ser possível realizar o resfriamento de amostras de sêmen normospérmico a +4ºC por até 72 horas.